鸭源鸡杆菌对HeLa细胞的黏附和侵袭特性

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.02.017

摘要/Abstract

摘要：

为研究鸭源鸡杆菌（G.anatis）体外黏附和侵袭细胞的能力，选择HeLa 细胞为感染模型，分别以细菌黏附和侵袭HeLa 细胞数量为指标，借助革兰和姬姆萨染色及电镜观察来研究2株不同来源的鸭源鸡杆菌对HeLa细胞的黏附和侵袭特性。结果显示：黏附计数表明鸭源鸡杆菌Yu-PDS-RZ-1-SLG能高水平黏附HeLa 细胞，菌株感染30、60、90、120、150 min后每细胞黏附的细菌数分别为0.84、4.68、8.52、9.27、8.2个，而菌株F149^T 对HeLa细胞有较低的黏附作用。侵袭试验表明Yu-PDS-RZ-1-SLG有低度侵袭力，侵袭的细菌数在150 min时达到最大，约8.27•1 000细胞^－1，随后细胞破碎，细胞逐渐脱落，而菌株F149^T未检测到侵袭力。染色及电镜试验进一步证实鸭源鸡杆菌Yu-PDS-RZ-1-SLG可黏附于HeLa细胞表面并侵入细胞内部。菌株经胰蛋白酶处理后，细菌的黏附率显著降低，表明细菌的表面蛋白参与黏附。黏附和入侵特性是鸭源鸡杆菌定殖在组织表面重要的能力，该细胞模型的建立为进一步研究其致病机制提供了条件。

Abstract:

In order to determine the cell adhesion and invasion characteristics of Gallibacterium anatis（G.anatis），an in vitro HeLa cell model was established.The adhesion and invasion characteristics of 2 strains were evaluated by means of adhesion and invasion experiment，Gram and Giemsa staining，Scanning electron microscopy and Transmission electron microscopy.Adhesion counting assay demonstrated that the high adhesive of G.anatis Yu-PDS-RZ-1-SLG strain and adhering bacteria numbers were 0.84•cell^－1，4.68•cell^－1，8.52•cell^－1，9.27•cell^－1 and 8.2 •cell^－1 at 30，60，90，120，150 min after infection，respectively.G.anatis F149^Tstrain revealed a weak adhesive level.Invasion assay showed weak invasive of G.anatis Yu-PDS-RZ-1-SLG strain and no invasion of G.anatis F149^Tstrain，and invading bacteria numbers of G.anatis Yu-PDS-RZ-1-SLG strain reached the maximum at 150 min，about 8.27 per 1 000 cells，but cell disruption，cell activity weakened subsequently.Staining results and electron microscopy experiments further confirmed that G.anatis Yu-PDS-RZ-1-SLG strain adhere to surface and invade Hela cells.Adherence was prevented by treating bacterial cells with trypsin，suggesting the participation of proteins in this process.The adhesive and invasive capacity could be an important ability for colonization of tissue surfaces of G.anatis.The establishment of cell model provided the basis for further research on pathogenic mechanism of G.anatis.

中图分类号:

S852.612

张秀平，陈陆，赵军，王川庆，李永涛，刘红英，彭志锋，卢彩景，敬文宪，杨霞. 鸭源鸡杆菌对HeLa细胞的黏附和侵袭特性[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(2): 295-302.

ZHANG Xiu-ping，CHEN Lu，ZHAO Jun，WANG Chuan-qing，LI Yong-tao，LIU Hong-ying，PENG Zhi-feng，LU Cai-jing，JING Wen-xian，YANG Xia. Adhesion and Invasion Characteristics of Gallibacterium anatis to HeLa Cells[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(2): 295-302.

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.xmsyxb.com/CN/10.11843/j.issn.0366-6964.2015.02.017

https://www.xmsyxb.com/CN/Y2015/V46/I2/295

参考文献

［1］CHRISTENSEN H，BISGAARD M，BOJESEN A M，et al.Genetic relationships among avian isolates classified as Pasteurella haemolytica，Actinobacillus salpingitidis or Pasteurella anatis with proposal of Gallibacterium anatis gen.nov.，comb.nov.and description of additional genomospecies within Gallibacterium gen.nov ［J］.Int J Syst Evol Microbiol，2003，53（1）：275-287.
［2］BOJESEN A M，SHIVAPRASAD H L.Genetic diversity of Gallibacterium isolates from California turkeys ［J］.Avian Pathol，2007，36（3）：227-230.
［3］BOJESEN A M，NIELSEN S S，BISGAARD M.Prevalence and transmission of haemolytic Gallibacterium species in chicken production systems with different biosecurity levels ［J］.Avian Pathol，2003，32（5）：503-510.
［4］NEUBAUER C，DE SOUZA-PILZ M，BOJESEN A M，et al.Tissue distribution of haemolytic Gallibacterium anatis isolates in laying birds with reproductive disorders ［J］.Avian Pathol，2009，38（1）：1-7.
［5］王川庆，陈陆，杨霞，等.蛋鸡群卡氏杆菌感染情况的初步研究［J］.河南农业科学，2008（3）：97-100，103.
WANG C Q，CHEN L，YANG X，et al.A premilinary study of Gallibacterium anantis infection in laying hens［J］.Journal of Henan Agricultural Sciences，2008（3）：97-100，103.（in Chinese）
［6］王珊，陈陆，付仁一，等.我国部分地区蛋鸡群鸭源鸡杆菌血清流行病学调查［J］.中国预防兽医学报，2011，33（2）：114-117.
WANG S，CHEN L，FU R Y，et al.Seroepidemiological survey of Gallibacterium anantis infection in layer chicken flocks in some provinces［J］.Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，2011，33（2）：114-117.（in Chinese）
［7］AUBIN G G，HALOUN A，TREILHAUD M，et al.Gallibacterium anatis bacteremia in a human ［J］.J Clin Microbiol，2013，51（11）：3897-3899.
［8］黄留玉，史兆兴，袁静，等.痢疾杆菌侵袭HeLa细胞基因表达谱的研究［J］.微生物学报，2007，47（5）：810-816.
HUANG L Y，SHI Z X，YUAN J，et al.Expression profile analysis of host HeLa cells invasived by Shigella flexneri 2a［J］.Acta Microbiologica Sinica，2007，47（5）：810-816.（in Chinese）
［9］恩特马克•布拉提白，晁群芳，吾鲁木汗•那扎尔别克，等.猪多杀性巴氏杆菌对HeLa细胞附着能力的研究［J］.中国预防兽医学报，2005，41（4）：7.
BORRATYBAY E，CHAO Q F，NAZARBEK U，et al.Study on adhesion of swine Pasteurella multocida strains to HeLa cells ［J］.Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，2005，41（4）：7.（in Chinese）
［10］VACA S，MONROY E，ROJAS L，et al.Adherence of Gallibacterium anatis to inert surfaces ［J］.J Anim Vet Adv，2011，10（13）：1688-1693.
［11］LUCIO M L S，VACA S，VAZQUEZ C，et al.Adhesion of Gallibacterium anatis to chicken oropharyngeal epithelial cells and the identification of putative fimbriae ［J］.Advances Microbiol，2012，2（4）：505-510.
［12］OTHMAN S，PARTON R，COOTE J.Interaction between mammalian cells and Pasteurella multocida B：2.Adherence，invasion and intracellular survival ［J］.Micro Pathog，2012，52（6）:353-358.
［13］FRANDOLOSO R，MARTÍNEZ S，GUTIÉRREZ-MARTÍN C B，et al.Haemophilus parasuis serovar 5 Nagasaki strain adheres and invades PK-15 cells ［J］.Vet Microbiol,2012，154（3-4）：347-352.
［14］ZEPEDA A，RAMÍREZ S，VEGA V，et al.Hemagglutinating activity of Gallibacterium strains ［J］.Avian Dis，2009，53（1）：115-118.
［15］GOUNON P，JOUVE M，LE BOUGUÉNEC C.Immunocytochemistry of the AfaE adhesin and AfaD invasin produced by pathogenic Escherichia coli strains during interaction of the bacteria with HeLa cells by high-resolution scanning electron microscopy ［J］.Microbes Infect，2000，2（4）：359-365.
［16］李雪萍，钱雪琴,钱利生.志贺菌对HeLa细胞侵袭力的研究［J］.中国生物工程杂志，2005，25（6）：71-75.
LI X P，QIAN X Q，QIAN L S.Study on invasiveness of Shigella to HeLa cells［J］.China Biotechnology，2005，25（6）：71-75.（in Chinese）
［17］胡彩虹，夏枚生，熊莉，等.嗜水气单胞菌体外粘附Caco-2细胞对细胞膜生物学特性的影响［J］.中国兽医学报，2006，26（3）：281-283，287.
HU C H，XIA M S，XIONG L，et al.Effects of aeromonas hydrophila adhesion on membrane characteristics of Caco-2 cells in vitro［J］.Chinese Journal of Veterinary Science，2006，26（3）：281-283，287.（in Chinese）
［18］曾巧英，陆承平.猪链球菌2型对扁桃腺上皮细胞的黏附和侵袭作用［J］.微生物学报，2004，44（4）：523-525.
ZENG Q Y，LU C P.Adhesion and invasion of streptococcus suis type 2 to tonsil epithelial cells from neonatal rabbit［J］.Acta Microbiologica Sinica，2004，44（4）：523-525.（in Chinese）
［19］KRISTENSEN B M，FREES D，BOJESEN A M.GtxA from Gallibacterium anatis，a cytolytic RTX-toxin with a novel domain organization ［J］.Vet Res，2010，41（3）：25.
［20］DE OLIVEIRA-GARCIA D，DALL’AGNOL M，ROSALES M，et al.Fimbriae and adherence of Stenotrophomonas maltophilia to epithelial cells and to abiotic surfaces ［J］.Cell Microbiol，2003，5（9）：625-636.
［21］BAGER R J，PERSSON G，NESTA B，et al.Outer membrane vesicles reflect environmental cues in Gallibacterium anatis ［J］.Vet Microbiol，2013，167（3-4）：565-572.
［22］JOHNSON T J，DANZEISEN J L，TRAMPEL D，et al.Genome analysis and phylogenetic relatedness of Gallibacterium anatis strains from poultry ［J］. PLoS One，2013，8（1）：e54844.

[1]	支岩, 梅晨, 刘珍邑, 乌云格日乐, 王宏俊, 胡格. 副鸡禽杆菌毒力因子研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 4934-4942.
[2]	王佳宁, 张自强, 孔德婧, 冯彩彩, 张飞可, 刘玉梅. 家兔肺炎克雷伯菌的分离鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5198-5206.
[3]	李莉莉, 陈凯风, 陈兵, 周洲平, 王南威, 瞿孝云, 徐成刚, 廖明, 张建民. STM1827在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成及环境应激中的调控作用[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5207-5217.
[4]	佟盼盼, 黄顺敏, 王芋丹, 施旭辉, 陈文霞, 宋鑫龙, 张毅, 苏战强, 谢金鑫. 新疆地区腹泻仔猪源大肠杆菌的分群、血清型鉴定及耐药性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(1): 414-420.
[5]	王斐, 杨洁, 吕庆杰, 王米雪, 刘鹏, 张若愚, 史聪聪, 王雪莹, 林琳, 华琳, 宋文博, 梁婉, 陈焕春, 吴斌, 彭忠. 致脑膜炎多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及全基因组重测序[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(12): 4346-4355.
[6]	门凯凯, 刘佳隆, 郭亚格, 何雷, 贾艳艳, 余祖华. 鸡TGF-β1对大肠杆菌和鸡白痢沙门菌黏附DF1细胞的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(11): 4000-4007.
[7]	杨洋, 谢黎卿, 胡沛, 高丽旭, 袁祥, 李攀, 彭远义, 李能章. 牛源A型多杀性巴氏杆菌hyaD基因缺失株的构建及其在小鼠上的交叉保护性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(10): 3582-3597.
[8]	邵颖, 傅丹丹, 吴晓妍, 谷一, 宋祥军, 涂健, 祁克宗. ETT2结构基因epaPQR对禽致病性大肠杆菌生物学特性及致病性的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(10): 3631-3641.
[9]	许文博, 吴丽梅, 刘鑫, 李升, 黄复深, 李润成. 1株多杀性巴氏杆菌的全基因组序列及致病相关基因分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(6): 1858-1869.
[10]	王喜, 李珂, 李廷翠, 严红亚, 赵蓉, 常志顺, 廖明, 孙敏华, 信爱国. 75株蛋鸡源沙门菌的MLST分型与耐药性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(5): 1626-1631.
[11]	王俊, 李军, 崔国林. FliC蛋白R91S突变对肠炎沙门菌鞭毛形态和小鼠体内定植的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(2): 607-617.
[12]	佟盼盼, 张萌萌, 陈文霞, 刘璐瑶, 张凌, 唐雪林, 苏战强, 谢金鑫. 新疆牛、羊和骆驼源产志贺毒素大肠埃希菌的系统进化分群、血清群与毒力基因及耐药性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(12): 3660-3668.
[13]	陈超群, 陈佳莉, 周萱仪, 吴雪, 汪津丞, 黄安雄, 郝海红. β-内酰胺类药物对副猪嗜血杆菌流行病学临界值的建立及耐药性的测定[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(11): 3234-3245.
[14]	何卓琳, 唐敏嘉, 张雪婧, 侯晓, 蒲万霞. 奶牛养殖场环境大肠杆菌的ERIC-PCR分型和系统进化分群[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(7): 2059-2064.
[15]	易正飞, 张耀东, 王瑶, 朱红, 陶程琳, AFAYIBO Dossêh Jean Apôtre, 李涛, 祁晶晶, 田明星, 丁铲, 于圣青, 王少辉. 双组分系统CpxR影响禽致病性大肠杆菌的耐药性、抗血清杀菌能力及毒力[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(4): 1053-1060.